丹参F3'5'H基因克隆及其序列分析

目的:为了验证丹参类黄酮-3′,5′-羟基化酶(Flavonoid 3′,5′-hydroxylase,F3′5′H)基因与丹参花色表型的相关性,本研究克隆并分析了紫花丹参99-3株系和一些白花丹参中的F3′5′H基因。方法:本研究通过提取紫花丹参和白花丹参中的总RNA,再将其反转录得到cDNA,以此cDNA为模板,利用PCR方法扩增获得F3′5′H基因全长序列。再利用生物信息学分析方法,分析了该基因编码蛋白质的理化性状、结构域、系统进化等特点,并预测了该蛋白质的亚细胞定位、跨膜区等;利用实时定量PCR方法检测了该基因的表达特异性;利用毛状根遗传转化方法获得了该基因的过表达阳性毛状根株系。结果:F3′5′H基因全长1551 bp,编码516个氨基酸,相对分子质量为57.4 kDa。该基因在丹参花中高丰度表达。在42份(紫花25份;白花17份)丹参样品中发现一个单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphisms,SNP)位点在紫花和白花丹参中呈现与花色相关的稳定变化。系统发育分析表明丹参F3′5′H与美女樱的F3′5′H具有较高序列同源性。获得了过表达F3′5′H的毛状根株系。结论:本研究在丹参中克隆到F3′5′H基因,对其序列进行了分析,为进一步研究丹参F3′5′H基因的功能奠定基础。     

苓桂术甘汤中多糖结构组成及其抗氧化活性考察

目的:研究苓桂术甘汤中多糖的结构,包括单糖组成以及官能团检测,并对其抗氧化能力进行评估,为体外生物测定法运用于苓桂术甘汤的质量评价提供基础。方法:利用高效凝胶色谱对全方多糖分子量进行研究;进一步采用气相色谱-质谱(GC-MS)柱前衍生化法及红外光谱扫描分析全方多糖结构组成;采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)及羟基自由基测定全方粗多糖及精多糖的抗氧化能力。结果:全方多糖由单一峰组成,且相对分子质量为3 689 Da,主要由阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、果糖组成,摩尔比为6. 85∶1. 00∶109. 21∶1. 04∶21. 82,其中葡萄糖和果糖为主要组成成分;红外结果显示聚糖结构中存在吡喃糖及糖醛酸,并且糖苷键存在2种立体异构(α-糖苷键及β-糖苷键);抗氧化研究发现全方多糖有一定清除DPPH自由基及羟基自由基的能力,粗多糖的活性优于精多糖。进一步采用LC-Q-TOF-MS对粗多糖中的其他成分进行定性分析,提示这与甘草中五环三萜类成分的吸附有关。结论:苓桂术甘汤中多糖及五环三萜类物质均是苓桂术甘汤抗氧化作用的物质基础,利用体外生物测定法测定抗氧化活性可作为全面控制苓桂术甘汤质量的评价指标。     

甘草种子与种苗质量分级标准研究

目的:研究甘草种子、种苗质量分级标准,为甘草药材规范化生产奠定基础。方法:以全国主产区所流通的甘草种子、种苗为样本,通过收集种子的发芽率、净度、含水量、千粒质量,种苗的根长、芦头直径和百株质量等指标信息,采用K-均值聚类分析法、标准差法、平均值法并结合生产实践对甘草种子、种苗进行分级,并开展田间栽培比较试验,对等级划分的合理性进行验证。结果:甘草种子质量等级划分为3个等级,各级甘草种子的千粒质量不低于8 g,含水量不低于10%,一级种子:发芽率≥90%,净度≥90%;二级种子:90%>发芽率≥85%,90%>净度≥85%;三级种子:85%>发芽率≥80%,85%>净度≥80%。甘草种苗质量等级划分为3个等级,一级种苗:根长≥45 cm,芦头直径≥0.8 cm,1.3 kg≤百株质量<0.8 kg;二级种苗:45 cm>根长≥35 cm,0.8 cm>芦头直径≥0.6 cm,0.8 kg≤百株质量<0.4 kg;三级种苗:35 cm>根长≥25 cm,0.6 cm>芦头直径≥0.4 cm,0.4 kg≤百株质量≤0.2 kg。结论:经验证,甘草种子、种苗质量等级划分合理,便于生产实践应用。     

清肺利咽汤治疗小儿化脓性扁桃体炎肺胃热盛证疗效及对患儿炎症因子和T淋巴细胞亚群的影响

目的观察清肺利咽汤治疗小儿化脓性扁桃体炎肺胃热盛证的临床疗效及对患儿炎症因子和外周血T淋巴细胞亚群的影响。方法将120例化脓性扁桃体炎肺胃热盛证患儿按照随机数字表法分为2组。对照组60例予常规西药治疗,治疗组60例在对照组治疗基础上加清肺利咽汤。2组均治疗1周。比较2组疗效;比较2组治疗前后血清炎症因子白细胞介素4(IL-4)、IL-6水平变化,外周血T淋巴细胞亚群CD3~+、CD4~+、CD8~+及CD4~+/CD8~+水平变化,临床症状改善情况,血白细胞计数(WBC)、中性粒细胞百分比及C反应蛋白(CRP)变化。结果治疗组总有效率96. 7%(58/60),对照组总有效率81. 7%(49/60),治疗组疗效优于对照组(P 0. 05)。2组治疗后IL-4、IL-6水平均较本组治疗前降低(P 0. 05),且治疗组降低更明显(P 0. 05)。2组治疗后CD3~+、CD4~+及CD4~+/CD8~+水平均较本组治疗前升高(P 0. 05),CD8~+较本组治疗前降低(P 0. 05),且治疗后治疗组CD3~+、CD4~+及CD4~+/CD8~+水平均高于对照组(P 0. 05),CD8~+低于对照组(P 0. 05)。2组治疗后WBC、中性粒细胞百分比及CRP均较本组治疗前降低(P 0. 05),且治疗组降低更明显(P 0. 05)。治疗组咳嗽、发热及扁桃体红肿消失时间均较对照组缩短(P 0. 05)。结论清肺利咽汤治疗小儿化脓性扁桃体炎肺胃热盛证,能有效降低炎症因子水平,改善外周血T淋巴细胞亚群水平,改善临床症状。     

新型冠状病毒肺炎疫情期间乳腺癌患者诊疗建议

目的乳腺癌患者受疾病或抗肿瘤治疗的影响,机体处于免疫低下状态,是2019新型冠状病毒肺炎(corona virus disease 2019,COVID-19)的易感人群之一。本研究为乳腺癌患者在COVID-19疫情期间提出诊疗建议。方法应用维普、知网、PubMed检索系统,以"新型冠状病毒肺炎、乳腺癌、指南、延迟、时机"或"COVID-19、breast cancer、guidelines、delaying、timeliness"等为检索词,检索2014-01-2020-01相关文献,共检索到英文文献19篇,中文文献12篇。纳入标准:(1)报道乳腺癌手术、化疗、放疗或内分泌治疗延迟治疗情况;(2)有关COVID-19诊治流程管理;(3)乳腺癌诊治指南。根据标准共纳入20篇文献。结果针对目前国内的疫情,对于常规复查患者,在病情稳定情况下可暂缓复查。对于晚期患者维持治疗阶段,应根据患者症状、肿瘤负荷,适当简化检查,重点检查靶病灶或症状明显的器官。对于内分泌治疗、靶向维持治疗、进行骨相关治疗、化疗及放疗的患者,应根据疾病分期和治疗阶段,维持或调整治疗方案。对于乳腺癌手术患者,可短时间暂缓手术。如确定要实施手术,应尽可能缩小手术范围,缩短手术时间。结论在COVID-19疫情的特殊时期,乳腺癌患者的治疗应遵循指南,合理诊治,科学防护。     

神经胶质细胞参与吗啡耐受机制及治疗的研究进展

 吗啡是临床上常用的强效镇痛药，然而长期应用会导致其镇痛效能降低，发生吗啡耐受。以往对吗啡耐受机制的研究主要集中在脊髓神经元敏化等中枢神经元机制，近年来越来越多的学者开始关注神经胶质细胞，特别是小胶质细胞和星形胶质细胞，在吗啡耐受形成中的作用。本文简要综述了神经胶质细胞参与吗啡耐受的作用机制及其治疗的研究进展，为解决临床上中重度疼痛治疗中的难点问题提供新的解决思路与依据。     

某院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药基因分析

目的研究某院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)在细菌耐药方面的分子流行病学特征,为CRE的防控提供依据。方法收集某院2013—2017年细菌室保存的CRE,对其进行多位点序列分型(MLST)、药敏试验、全基因序列测定,选取部分CRE中携带的碳青霉烯耐药基因进行基因环境分析。结果共收集62株CRE,成功复活51株;其中耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)30株,耐碳青霉烯类大肠埃希菌(CREC)9株,耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌(CRECL)6株,耐碳青霉烯类其他肠杆菌6株。CRKP MLST主要包括3株ST147、2株ST11;CREC MLST主要包括3株ST167;CRECL MLST主要包括3株ST93、2株ST88。51株CRE对氨苄西林、头孢噻肟的耐药率最高,均为100%。耐碳青霉烯类耐药基因分布:1株携带blaKPC-2,14株携带blaIMP-4,18株携带blaNDM-1,22株携带blaNDM-5,2株携带blaNDM-9,10株携带blaOXA-1,10株携带blaOXA-10,2株携带blaOXA-23,2株携带blaOXA-66。分析blaNDM-1、blaNDM-5、blaNDM-9、blaIMP-4不同菌种的基因环境,发现几种耐药基因各自的基因环境都与已报道的基因环境相似,无明显的菌种间差异性。结论耐药基因通过水平传播能稳定存在于不同的CRE菌株中,对医院感染防控造成一定的威胁。     

序贯培养体系和单一培养体系对人卵母细胞受精和早期胚胎发育的影响

目的：比较在体外受精/卵胞质内单精子显微注射（IVF/ICSI）治疗周期中序贯培养体系和单一培养体系对人类早期胚胎发育的影响，为人类辅助生殖技术中胚胎培养体系的选择和评估提供参考。方法：选取155例行IVF/ICSI助孕的患者，将同一个患者的卵子分为2组，分别在Vitrolife的序贯培养体系G-IVF/G1/G2培养液（序贯培养组）和Irvine的单一培养体系CSCC培养液（单一培养组）中进行体外受精和胚胎培养，观察2组不同培养体系中胚胎受精和胚胎早期发育情况。结果：与单一培养组比较，序贯培养组受精率、双原核（2PN）受精率和多核受精率差异均无统计学意义（P>0.05）。在IVF患者中，序贯培养组和单一培养组的卵裂率、可用胚胎率、优质胚胎率和囊胚形成率比较差异均无统计学意义（P>0.05）；在ICSI患者中，序贯培养组和单一培养组的卵裂率、可用胚胎率和囊胚形成率比较差异均无统计学意义（P>0.05），但序贯培养组优质胚胎率明显高于单一培养组（P=0.015）。在IVF和ICSI患者中，单一培养组第3天胚胎致密化的比例均明显高于序贯培养组（P=0.001）。在序贯培养组中胚胎形态表面光滑均匀，单一培养组中胚胎表面较为粗糙且有颗粒状。结论：G-IVF/G1/G2序贯培养体系和CSCC单一培养体系对人卵母细胞受精和早期胚胎发育的影响无明显差异。     

基于网络药理学和分子对接研究淫羊藿治疗抑郁症的抗炎作用机制

目的:采用网络药理学方法预测淫羊藿治疗抑郁症的抗炎靶点及相关信号通路,探讨其抗抑郁作用的潜在机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)数据库搜集和筛选淫羊藿的活性成分;利用PharmMapper服务器,TCMSP数据库对蛋白靶点进行预测和筛选;利用OMIM数据库,CTD数据库和GeneCards数据库筛选抑郁症的相关靶点以及抗炎靶点;通过DAVID数据库对关键抗炎靶点进行基因本体(GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;利用Cytoscape 3.6.0软件构建淫羊藿"活性成分-作用靶点-信号通路"网络图,并对网络拓扑结构分析;采用GOLD分子对接软件对活性成分与关键抗炎靶点进行结果验证。结果:筛选得到淫羊藿与抑郁症相关的12个活性成分,30个作用靶点,5个关键抗炎靶点;GO功能富集得到生物过程65个,细胞组成4个,分子功能1个,KEGG通路富集分析得到41条,其中与炎症相关的信号通路9个;分子对接验证淫羊藿苷与关键抗炎靶点能够形成最佳复合体。结论:揭示了淫羊藿通过抗炎靶点及其相关信号通路网络作用于抑郁症的分子机制,为进一步研究淫羊藿抗抑郁作用提供了基础。     

复方斑蝥胶囊辅助化疗治疗老年晚期非小细胞肺癌临床研究

目的:探讨复方斑蝥胶囊辅助化疗对老年晚期非小细胞肺癌患者的疗效以及对血清生存素(Survivin)和胸苷激酶1水平的影响。方法:将60例晚期非小细胞肺癌老年患者按数字表法随机分为对照组和观察组各30例。对照组按规范给予TP方案。观察组在对照组基础上采取复方斑蝥胶囊治疗,连续治疗6周。比较2组临床疗效、T淋巴细胞亚群变化、血清Survivin和胸苷激酶1水平。结果:观察组近期总有效率为66.67%,显著高于对照组43.33%(P0.05)。观察组治疗后CD3~+、CD3~+/CD4~+显著升高且明显多于对照组,CD3~+/CD8~+显著降低且明显低于对照组(P0.01)。对照组治疗前后CD3~+、CD3~+/CD4~+、CD3~+/CD8~+治疗前后变化不明显(P0.05)。2组治疗后血清Survivin、胸苷激酶1水平降低(P0.01);且观察组治疗后血清Survivin、胸苷激酶1水平低于对照组(P0.01)。结论:复方斑蝥胶囊辅助化疗可增强晚期非小细胞肺癌老年患者的免疫功能,提高临床疗效,且可抑制血清Survivin和胸苷激酶1水平。